| 稳定表达猪水疱病病毒P1基因的PK-15细胞系的建立 |
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| 引用本文： | 田宏,吴锦艳,龚真莉,郑海学,孙世琪,尚佑军,刘湘涛,谢庆阁. 稳定表达猪水疱病病毒P1基因的PK-15细胞系的建立[J]. 畜牧兽医学报, 2008, 39(4): 478-482 |
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| 作者姓名： | 田宏 吴锦艳 龚真莉 郑海学 孙世琪 尚佑军 刘湘涛 谢庆阁 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,农业部畜禽病毒学重点开放实验室,兰州,730046 |
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| 基金项目： | 国家863高技术研究发展计划(2003AA241110) |
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| 摘 要： | 从猪水疱病全长感染性cDNA中，应用PCR技术扩增到SVDV结构蛋白P1基因，并在目的片段的5′端引入Kozak序列（Kozak，1987），定向克隆于逆转录病毒载体pBABE puro。经PCR、酶切和序列分析鉴定，获得阳性重组质粒。将该重组质粒与水疱性口炎病毒载体pVSV-G共转染GP2-293细胞，收获假型病毒，在Polybrene的介导下感染PK-15细胞，嘌呤霉素筛选阳性细胞克隆。免疫荧光连续检测阳性克隆传代细胞，发现在不同代次的细胞中均有SVDV P1蛋白表达，而且表达的蛋白可被SVD阳性血清所识别；同时应用PCR技术，可从体外反复传代阳性细胞基因组中扩增到SVD P1基因。表明本次所筛选的阳性细胞克隆不但能持续稳定地表达SVD P1蛋白，而且可携带外源基因进行传代，具有良好的遗传稳定性。
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| 关 键 词： | 猪水疱病病毒P1基因 重组逆转录病毒载体 PK-15细胞 基因表达 |
| 文章编号： | 0366-6964(2008)04-0478-05 |
| 修稿时间： | 2007-04-06 |
Establishment of a Stable PK-15 Cell Line Expressing the P1 Gene of Swine Vesicular Disease Virus |
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| TIAN Hong,WU Jin-yan,GONG Zhen-li,ZHENG Hai-xue,SUN Shi-qi,SHANG You-jun,LIU Xiang-tao,XIE Qing-ge. Establishment of a Stable PK-15 Cell Line Expressing the P1 Gene of Swine Vesicular Disease Virus[J]. Chinese Journal of Animal and Veterinary Sciences, 2008, 39(4): 478-482 |
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| Authors: | TIAN Hong WU Jin-yan GONG Zhen-li ZHENG Hai-xue SUN Shi-qi SHANG You-jun LIU Xiang-tao XIE Qing-ge |
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