| 重组铜绿假单胞菌外膜蛋白D的原核表达与多克隆抗体制备研究 |
| |
| 引用本文： | 伍娜娜,荣娜,康超,刘祥,陈琛,陈春琳,马心怡,吴三桥.重组铜绿假单胞菌外膜蛋白D的原核表达与多克隆抗体制备研究[J].河北农业大学学报,2019,42(1):99-105. |
| |
| 作者姓名： | 伍娜娜 荣娜 康超 刘祥 陈琛 陈春琳 马心怡 吴三桥 |
| |
| 作者单位： | 陕西理工大学生物科学与工程学院/中德天然产物研究所,陕西汉中,723001;陕西省天麻山茱萸工程技术研究中心,陕西汉中,723001 |
| |
| 基金项目： | 陕西省教育厅科学研究项目;陕西理工大学人才项目;国家外专局项目 |
| |
| 摘 要： | 为获得铜绿假单胞菌外膜蛋白OprD并研究其分子功能。本研究采用分子克隆构建OprD蛋白重组表达菌株,用正交试验设计方法获得OprD菌株的最优表达条件和培养条件,通过SDS-PAGE切胶的方法纯化OprD蛋白,小鼠免疫制备OprD多克隆抗血清,蛋白质印迹法检测抗血清的特异性。使用DNAMan和MEGA软件对OprD蛋白进行同源性和系统发生分析。结果表明,OprD重组载体双酶切、DNA测序鉴定结果、OprD蛋白表达与纯化条带大小分别与预测相符。正交试验获得OprD菌株的最优培养条件为:葡萄糖浓度为0,转速230r/min,装液量为50mL;最优表达条件为:菌液OD600=0.8时加入终浓度为0.3mmol/L的异丙基β-D-1-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG),37℃诱导12h。SDS-PAGE电泳切胶纯化获得纯度较高的OprD蛋白。蛋白质印迹法证实OprD蛋白抗血清具有较好的特异性。OprD蛋白序列系统发生分析发现,同菌属细菌存在较高的同源性,并且亲缘关系较近的细菌中OprD蛋白可能具有相似的分子功能。
|
| 关 键 词： | 铜绿假单胞菌 外膜蛋白OprD 多克隆抗体 诱导条件 |
Prokaryotic expression and polyclonal antibody preparation of recombinant Pseudomonas aeruginosa outer membrane protein D |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
|
