| 草鱼肾中性粒细胞的分离鉴定与活性检测 |
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| 引用本文： | 常藕琴,霍礼霞,罗满林,石存斌,张德峰,潘厚军,任燕.草鱼肾中性粒细胞的分离鉴定与活性检测[J].中国水产科学,2021,28(12):1515-1522. |
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| 作者姓名： | 常藕琴 霍礼霞 罗满林 石存斌 张德峰 潘厚军 任燕 |
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| 作者单位： | 中国水产科学研究院珠江水产研究所, 农业农村部渔用药物创制重点实验室, 广东省水产动物免疫技术重点实验室, 广东 广州 510380;中国水产科学研究院珠江水产研究所, 农业农村部渔用药物创制重点实验室, 广东省水产动物免疫技术重点实验室, 广东 广州 510380 ；华南农业大学, 广东 广州 510225 |
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| 基金项目： | 广州市科技计划项目(201904020004)； 财政部和农业农村部: 国家现代农业产业技术体系项目(CARS-45). |
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| 摘 要： | 分离纯化草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肾中性粒细胞、鉴定和检测其活性, 目的在于为研究中性粒细胞的功能和免疫防御机制提供细胞材料。本研究使用鱼类脏器组织中性粒细胞分离试剂盒和差异贴壁法分离获得草鱼肾中性粒细胞; 应用迪夫氏染色、碘化钾-吡啰红 G (KI-Py G)染色、电镜技术鉴定细胞形态, 使用多功能酶标仪检测经 MPA 刺激的细胞活性, 台盼蓝染色法和 CCK-8 检测细胞存活率。结果显示, 获得的细胞大小均一, 细胞核圆形或肾形, 胞质有 A、B 型颗粒, 表面有皱褶, 具有中性粒细胞的形态特征; 细胞纯度达(99.3±0.53)%, 细胞活力达 (97.70±0.76)%, 在体外培养 24 h 内细胞存活率可保持在(89.91±3.56)%; 在 PMA 刺激下检测到细胞表达 MPO、 ROS、NO 和 NETs 的量显著提高(P＜0.05), 与刺激时间呈正相关。结果证实, 分离的细胞具有很好的活力, 具有中性粒细胞的功能特征。本研究成功建立草鱼中性粒细胞的分离方法, 细胞具有很好的活力, 可为深入研究鱼类中性粒细胞的功能和免疫机制提供基础。
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| 关 键 词： | 草鱼 中性粒细胞 分离 鉴定 活性检测 |
Isolation, identification, and activity detection of neutrophils from the grass carp kidney |
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| CHANG Ouqin,HUO Lixi,LUO Manlin,SHI Cunbin,ZHANG Defeng,PAN Houjun,REN Yan.Isolation, identification, and activity detection of neutrophils from the grass carp kidney[J].Journal of Fishery Sciences of China,2021,28(12):1515-1522. |
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| Authors: | CHANG Ouqin HUO Lixi LUO Manlin SHI Cunbin ZHANG Defeng PAN Houjun REN Yan |
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