多重PCR鉴定三种颚口线虫方法的建立 |
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引用本文: | 李树清,李雯雯,张鸿满,陈韶红,李健,陈志飞,王巧全,张永年,黄维义.多重PCR鉴定三种颚口线虫方法的建立[J].中国动物传染病学报,2014(6):38-45. |
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作者姓名: | 李树清 李雯雯 张鸿满 陈韶红 李健 陈志飞 王巧全 张永年 黄维义 |
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作者单位: | 上海出入境检验检疫局;中山大学附属第一医院动物实验中心;广西疾病预防控制中心;中国疫病预防控制中心寄生虫病预防控制所;广西大学动物科学技术学院 |
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基金项目: | 上海市科委技术标准专项(11dz0503100);国家质检总局科技专项(2010IK013) |
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摘 要: | 为了建立快速、灵敏、可靠的鉴别颚口线虫虫种的方法,根据GenBank中发表的棘颚口线虫、日本颚口线虫和杜氏颚口线虫ITS-2序列,设计了3对特异引物,建立了这3种颚口线虫的单一PCR和多重PCR检测方法,并分别对单一PCR和多重PCR方法的特异性和敏感性进行了鉴定。结果显示单一PCR和多重PCR均能特异扩增出棘颚口线虫、日本颚口线虫和杜氏颚口线虫,其片段大小分别为282、358、183 bp,单一PCR对棘颚口线虫、日本颚口线虫和杜氏颚口线虫虫体DNA最小检出量分别为0.2、0.01、0.01 ng/μL。对宫脂线虫、异尖线虫、棘口吸虫以及迭宫绦虫均不能进行扩增。用建立的多重PCR方法对菲律宾、印度尼西亚、黑龙江颚口线虫等12条颚口线虫DNA模板进行扩增,经鉴定菲律宾与印度尼西亚的颚口线虫为棘颚口线虫,黑龙江的颚口线虫为日本颚口线虫。鉴定结果与原虫体样本的形态鉴定和测序分析结果一致。研究显示建立的多重PCR方法具有很强的特异性和较高的敏感性,可用于棘颚口线虫、日本颚口线虫和杜氏颚口线虫虫种的鉴定和流行病学调查。
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关 键 词: | 棘颚口线虫 日本颚口线虫 杜氏颚口线虫 多重PCR 虫种鉴定 |
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