鹅细小病毒NS1蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立

本研究克隆了鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)佛山株(Foshan-2009)的NS1基因,并将其克隆至原核表达载体p ET32a(+),构建重组质粒p ET32a-NS1。经转化,IPTG诱导表达及SDS-PAGE和Western blot分析表明,NS1蛋白得到了表达,并且能与抗GPV的番鸭血清发生特异性反应。通过棋盘法确定NS1蛋白包被量为0.5μg/孔,待检血清1:50稀释,HRP标记的兔抗鸭二抗1:10 000倍稀释时ELISA反应条件最佳,并确定阴阳性临界值为0.399。该ELISA方法特异性强,与番鸭细小病毒、鸭瘟病毒、鸭肝炎病毒、新城疫病毒和鸭疫里默氏杆菌的阳性血清均无交叉反应;重复性好,批内和批间重复试验的变异系数分别小于5%和10%;检出率高,GPV阳性番鸭血清的检出率为92%。本研究所建立的间接ELISA方法为鹅细小病毒的血清学诊断和流行病学监测奠定了基础。