板栗过氧化氢酶基因CmCAT的克隆与原核表达 |
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引用本文: | 刘裕峰,朱天辉,刘应高,谯天敏,李姝江,龙旭梅,韩珊.板栗过氧化氢酶基因CmCAT的克隆与原核表达[J].四川农业大学学报,2019(2):168-176. |
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作者姓名: | 刘裕峰 朱天辉 刘应高 谯天敏 李姝江 龙旭梅 韩珊 |
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作者单位: | 四川农业大学林学院 |
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摘 要: | 【目的】旨在克隆板栗CmCAT基因全长cDNA序列,分析其编码蛋白相关信息并进行原核表达研究。【方法】采用RT-PCR技术从板栗品种"石丰"中克隆获得CmCAT基因,用生物信息学方法对获得的cDNA序列及推定的氨基酸序列进行分析。构建原核表达载体pET28a-CmCAT,经PCR和酶切鉴定后转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。【结果】板栗CmCAT基因开放阅读框(ORF)为1 479 bp,共编码492个氨基酸,推测蛋白分子质量为56.883 kDa,理论等电点pI为5.83,GenBank登录号为KY312851。其核苷酸序列与核桃(Juglans regia)CAT基因序列相似性最高,为85%。遗传进化分析表明,板栗CmCAT与核桃的亲缘关系最近。SDS-PAGE电泳分析表明,在30℃条件下,0.2 mmol/L IPTG诱导6 h表达量最佳,诱导的目的蛋白分子量约为60 kDa,其主要以包涵体的形式存在。【结论】成功克隆了板栗CmCAT基因,并对其编码蛋白的理化性质进行了预测分析,在大肠杆菌中获得了大量的表达,为其进一步的生物学功能研究奠定了基础。
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关 键 词: | 板栗 过氧化氢酶 基因克隆 原核表达 |
Cloning and Prokaryotic Expression of Catalase Gene CmCAT from Castanea mollissima BL |
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Abstract: | |
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