| 摘 要： | 本研究在猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)弱毒株(Hu N4-F112)感染性克隆的基础上,在其基因组ORF1b和ORF2之间插入(classical swine fever,CSF)疫苗毒C株的E2基因,并在E2基因3'端下游插入PRRSV的转录调控序列6(transcription regulatory sequence 6,TRS6),构建成重组全长感染性克隆(p A-C-E2)。用SwaI线性化该质粒,并体外转录后,将RNA转染MARC-145细胞并传代1次,即可拯救出重组病毒vA-C-E2,在至少20代的传代过程中能够保持遗传稳定性。重组病毒与亲本病毒vHu N4-F112在病毒滴度、空斑形态、蛋白表达等方面没有明显差异;多步生长曲线结果显示,该重组病毒与亲本毒具有相似的生长特性。间接免疫荧光(indirect immunofl uorescence,IFA)结果显示,重组病毒不仅能够表达PRRSV N蛋白,也可以表达猪瘟病毒E2蛋白。本研究结果为研制CSF和PRRS新型基因重组疫苗奠定了坚实物质基础。
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