| 基于CRISPR/Cas9技术快速构建PRV gE基因缺失病毒 |
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| 引用本文： | 金铭,刘春羽,张洪亮,杭天宇,孙雨茗,赵洪哲,乌冬高娃,李伊铭,张赫,王凤雪,温永俊.基于CRISPR/Cas9技术快速构建PRV gE基因缺失病毒[J].中国动物检疫,2020,37(5):87-93. |
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| 作者姓名： | 金铭 刘春羽 张洪亮 杭天宇 孙雨茗 赵洪哲 乌冬高娃 李伊铭 张赫 王凤雪 温永俊 |
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| 基金项目： | 内蒙古农业大学协议引进人才项目（NDGCC2016-22） |
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| 摘 要： | 为快速、高效构建伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)糖蛋白E基因(gE)缺失病毒,基于CRISPR/Cas9基因编辑技术,首先将pSpCas9(BB)-2A-GFP荧光质粒转染至VERO细胞和PK-15细胞,选出转染效率较高的细胞系,同时于http://crispr.mit.edu/网站设计并合成3个高评分的小导向RNA(small guide RNA,sgRNA),通过噬斑形成试验,筛选出高效sgRNA。其次将筛选出的针对PRV gE基因的sgRNA转染于PK-15细胞,然后接种PRV-1病毒,经过5轮噬斑克隆纯化获得PRV-1-ΔgE。结果显示:VERO细胞比PK-15细胞具有更好的转染效果;gE-sgRNA1和gE-sgRNA2可作为针对gE基因的高效sgRNA;获得了1株PRV gE基因缺失291 bp的病毒,将其命名为PRV-1-ΔgE。研究表明,CRISPR/Cas9基因编辑技术可作为一种高效编辑PRV-1缺失病毒基因的方法,同时也为后续快速应对PRV变异株研究提供了新思路。
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| 关 键 词： | 伪狂犬病毒 变异毒株 糖蛋白E基因 CRISPR/Cas9 |
Construction of PRV gE-deleted Strain Based on CRISPR/Cas9 Technology |
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| Jin Ming,Liu Chunyu,Zhang Hongliang,Hang Tianyu,Sun Yuming,Zhao Hongzhe,Wudonggaow,Li Yiming,Zhang He,Wang Fengxue,Wen Yongjun.Construction of PRV gE-deleted Strain Based on CRISPR/Cas9 Technology[J].China Journal Of Animal Quarantine,2020,37(5):87-93. |
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| Authors: | Jin Ming Liu Chunyu Zhang Hongliang Hang Tianyu Sun Yuming Zhao Hongzhe Wudonggaow Li Yiming Zhang He Wang Fengxue Wen Yongjun |
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