| 不同浓度Cd2+胁迫下烟草实时荧光定量PCR内参基因的筛选 |
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| 引用本文： | 池俊玲,赵一博,郭江波,张龙,刘汉阳,辛翠花. 不同浓度Cd2+胁迫下烟草实时荧光定量PCR内参基因的筛选[J]. 南方农业学报, 2019, 50(10): 2133-2140. DOI: 10.3969/j.issn.2095-1191.2019.10.01 |
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| 作者姓名： | 池俊玲 赵一博 郭江波 张龙 刘汉阳 辛翠花 |
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| 作者单位： | 内蒙古科技大学生命科学与技术学院,内蒙古包头,014010 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;国家自然科学基金;内蒙古自治区自然科学基金;内蒙古自治区自然科学基金 |
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| 摘 要： | [目的]筛选出镉(Cd)胁迫下烟草的最佳内参基因,为后续研究与Cd2+相关的功能性基因提供理论依据.[方法]分别以0、250和500 mg/L氯化镉(CdCl2)溶液对本生烟草进行胁迫处理,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测不同浓度Cd2+胁迫处理下肌动蛋白基因(ACT)、微管蛋白基因(TUB)、蛋白磷酸酶2基因(PP2A)、18S rRNA、甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(GAPDH)及转录延伸因子基因(EF1a)6个候选内参基因的表达情况,并利用geNorm和Norm-Finder综合评价Ct各内参基因表达的稳定性.[结果]以不同浓度Cd2+胁迫处理的本生烟草cDNA为模板均可PCR扩增出ACT、TUB、18S rRNA、PP2A、GAPDH和EF1a等6个内参基因.6个内参基因的qRT-PCR扩增曲线走势正常,平行性好,无引物二聚体和非特异性条带产生,且绘制的标准曲线上各点基本分布在一条直线上,扩增效率在要求范围(90.00%~105.00%)之内,符合下一步评价要求,且斜率的回归系数(R2)>0.9800,说明线性关系较好.GAPDH和EF1a基因的表达丰度较高,18S rRNA处于中等水平,ACT、TUB和PP2A基因的表达丰度较低.geNorm分析结果显示,6个内参基因的表达稳定性排序为EF1a基因>GAPDH基因>ACT基因>TUB基因>PP2A基因>18S rRNA;Norm-Finder分析结果显示,6个内参基因的表达稳定性排序为EF1a基因>TUB基因>GAPDH基因=PP2A基因>ACT基因>18S rRNA.[结论]EF1a基因在不同浓度Cd2+胁迫处理下表达水平较高,稳定性最好,可作为Cd胁迫下本生烟草的最佳内参基因.
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| 关 键 词： | 烟草 镉胁迫 实时荧光定量PCR(qRT-PCR) 内参基因 筛选 |
Screening of internal reference genes for real-time fluorescence quantitative PCR under different concentrations of Cd2+stress in tobacco |
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| CHI Jun-ling,ZHAO Yi-bo,GUO Jiang-bo,ZHANG Long,LIU Han-yang,XIN Cui-hua. Screening of internal reference genes for real-time fluorescence quantitative PCR under different concentrations of Cd2+stress in tobacco[J]. Journal of Southern Agriculture, 2019, 50(10): 2133-2140. DOI: 10.3969/j.issn.2095-1191.2019.10.01 |
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| Authors: | CHI Jun-ling ZHAO Yi-bo GUO Jiang-bo ZHANG Long LIU Han-yang XIN Cui-hua |
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