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大豆查尔酮还原酶3基因(chr3)的克隆及体外催化活性分析
引用本文:张 超,王丕武,张 卓.大豆查尔酮还原酶3基因(chr3)的克隆及体外催化活性分析[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2015,43(9):89-96.
作者姓名:张 超  王丕武  张 卓
作者单位:吉林农业大学 农学院,吉林农业大学 农学院,吉林农业大学 生命科学学院
基金项目:国家自然科学基金面上项目“大豆查尔酮还原酶(CHR)在大豆苷元合成中的作用机理”(31171568)
摘    要:【目的】克隆大豆查尔酮还原酶3基因(chr3),并分析其编码蛋白体外催化活性,为研究大豆苷元的合成与调控研究提供参考。【方法】以大豆品种"吉农17"为材料,采用RACE技术扩增大豆chr3基因,对其编码蛋白的结构和功能位点进行分析。将目的基因chr3连接到大肠杆菌载体pET28a上,然后转化到大肠杆菌BL21中,构建重组大肠杆菌原核表达载体BL21-pET28a-chr3,并通过高效液相色谱技术(HPLC)验证重组蛋白的催化性质及效率。【结果】成功克隆chr3基因,其全长序列长1 416bp(GenBank登录号:KF927169),成功构建了大肠杆菌原核表达载体BL21-pET28a-chr3。HPLC检测结果表明,重组蛋白CHR3催化合成了异甘草素,使大豆异甘草素含量提高到了33.673μmol/g。【结论】分离鉴定了大豆chr3,其编码蛋白CHR3催化活性明显提高。

关 键 词:大豆  大豆苷元  查尔酮还原酶3基因  基因克隆  大肠杆菌
收稿时间:2014/1/20 0:00:00

Cloning of soybean chalcone reductase gene (chr3) and its expression in Escherichia coli
ZHANG Chao,WANG Pi-wu and ZHANG Zhuo.Cloning of soybean chalcone reductase gene (chr3) and its expression in Escherichia coli[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2015,43(9):89-96.
Authors:ZHANG Chao  WANG Pi-wu and ZHANG Zhuo
Abstract:
Keywords:soybean  daidzein  chalcone redutase 3 gene (chr3)  gene cloning  Escherichia coli
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