稻瘟茵胞外蛋白的提取及电泳方法初探 |
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作者姓名: | 常明 苏源 蔡永占 孔垂思 仓晓燕 杨静 刘林 朱有勇 李成云 |
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作者单位: | 云南农业大学农业生物多样性与病虫害控制教育部重点实验室,云南昆明650201 |
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摘 要: | 利用蛋白质组学研究方法对稻瘟菌的胞外蛋白进行分析,可以更好地了解该病原菌的生物学特性和致病机制。蛋白质样品制备和双向电泳,都是蛋白质组学研究的基础。采用冷冻干燥,透析结合法与三氯乙酸-脱氧胆酸钠沉淀法(TCA-DOC沉淀法)提取液体培养稻瘟菌得到的胞外蛋白,利用17cm pH3.0-10.0与17cm pH4.0-7.0两种pH梯度IPG胶条对同一样品进行第一向等电聚焦,12% SDS-PAGE凝胶进行第二向电泳,银染后用PDQuest软件(V7.4)对电泳图谱进行分析。结果表明,在上述两种提取稻瘟菌胞外蛋白的方法中,TCA-DOC沉淀法具有较好的提取效果,应用该实验方法得到的蛋白质分布在pH4.0-7.0之间的点数达到621个,因此在双向电泳中,采用pH4.0-7.0的胶条具有较好的分辨率。
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关 键 词: | 稻瘟菌 胞外蛋白 提取 双向电泳 |
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