哈茨木霉A25-2纤维二糖水解酶I基因的克隆及其编码催化功能域的序列在绿色木酶HP35-3中的表达

本研究从哈茨木霉（rrichoderma harzianMm）A25—2总RNA中利用RT—PCR的方法扩增到其纤维二糖水解酶I基因的cDNA序列，并对该基因编码的氨基酸序列进行分析，得到cbhI基因中编码催化功能域的序列。将催化功能域编码序列克隆到表达载体pCP—GH中，用PEG—CaCl2介导的原生质体转化方法将重组质粒转化到绿色木霉（Trichoderma viride）HP35—3中，筛选得到12个转化子。以P-NPC为底物，测定了该12个转化子的酶活力，获得比活力最高的转化子Tv／CDHI-CBM-5，其纤维二糖水解酶活力是HP35—3的3．8倍。SDS—PAGE分析表明，绿色木霉表达了导入的含A25—2纤维二糖水解酶I催化功能域的编码序列。