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| 猪细小病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR诊断试剂盒的研制 | |
| 作者姓名： | 余波 周思旋 谭诗文 徐景峨 史开志 杨莉 |
| 作者单位： | 贵州省畜牧兽医研究所,贵阳,550005 |
| 基金项目： | 贵州省农业攻关项目，贵州省畜禽健康养殖技术创新能力建设项目 |
| 摘 要： | 根据GenBank中猪细小病毒VP2基因序列设计特异性的引物,PCR扩增获得猪细小病毒VP2基因片段,并克隆到pMD-18T载体上作为阳性标准品.通过对SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR反应条件的优化,建立了猪细小病毒的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR诊断方法,以此为基础研制出试剂盒.试剂盒扩增产物的熔解曲线分析只出现1个单特异峰,无引物二聚体,对PRV、PCV-2、E.coli、CSFV、PRRSV均无阳性信号扩增,可重复性好,测灵敏度可达1.0×101拷贝/μL.结果表明,研制的猪细小病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR试剂盒具有特异、灵敏、快速、重复性好等优点,适合于猪细小病毒临床样品的检测. |
| 关 键 词： | 猪细小病毒 VP2基因 SYBR Green Ⅰ荧光定量 |
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