| 大肠杆菌表达重组Taq DNA聚合酶的分离和纯化 |
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| 引用本文： | 何钢,王义强,李樊,刘贤桂.大肠杆菌表达重组Taq DNA聚合酶的分离和纯化[J].中南林业科技大学学报,2006,26(5):50-54. |
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| 作者姓名： | 何钢 王义强 李樊 刘贤桂 |
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| 作者单位： | 中南林业科技大学生物环境科学与技术研究所，中南林业科技大学生物环境科学与技术研究所，中南林业科技大学生命科学与技术学院，中南林业科技大学资源与环境学院 湖南 长沙 410004，湖南 长沙 410004，湖南 长沙 410004，湖南 长沙 410004 |
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| 基金项目： | 中南林业科技大学校科研和教改项目 |
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| 摘 要： | 以插入Taq DNA聚合酶基因的pET-24a表达质粒转化E．coli菌株,表达Taq DNA聚合酶,用反复冻融的方法裂解菌体．表达产物为可溶性蛋白,采用Duo-Flow系统(Bio-Rad)及S柱,Tris缓冲液pH为7．5．以0-1 mol／L盐梯度洗脱方式,收集洗脱峰．透析去盐可得到高纯度的产品．经PCR反应与商品Taq酶的一个活性单位相比较,重组的Taq酶活性有1个单位．用该方法可以从1 L培养液中分离得到5．51 mg产品．
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| 关 键 词： | 生物技术 Taq DNA聚合酶 大肠杆菌 表达 分离 纯化 |
| 文章编号： | 1000-2502(2006)05-0050-05 |
| 修稿时间： | 2006年3月1日 |
Separation and Purification of Taq DNA Polymerase in E. coli |
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| HE Gang,WANG Yi-qiang,LI Fan,LIU Xian-gui.Separation and Purification of Taq DNA Polymerase in E. coli[J].Journal of Central South Forestry University,2006,26(5):50-54. |
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| Authors: | HE Gang WANG Yi-qiang LI Fan LIU Xian-gui |
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| Abstract: | To express the TaqDNA polymerase, the expression plasmid pET-24a inserted with TaqDNA polymerase gene was transformed into the host cell strain BL21(DE)3. Soluble protein was lysed by modified freeze-thrawing and products of high purification were obtained through Dou-Flow system (Bio-Rad) and S column. The conditions are as follows : tris buffer pH 7. 5 and salt elution gradient 0-1 mol/L. Compared to the active unit of the commercial enzyme of Taq reacted with PCR, transformed plasmid has already had 1 unit. 5. 51 mg product could be obtained from 1 L culture medium through this method. |
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| Keywords: | biotechnology Tsq DNA polymerase E coli expression separation purification |
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