羊口疮病毒ORFV113蛋白的转录动力学、真核表达及亚细胞定位 |
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引用本文: | 庞峰,龙琴琴,梁绍波.羊口疮病毒ORFV113蛋白的转录动力学、真核表达及亚细胞定位[J].华北农学报,2023(1):226-231. |
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作者姓名: | 庞峰 龙琴琴 梁绍波 |
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作者单位: | 1. 贵州大学动物科学学院;2. 贵州省动物疫病与兽医公共卫生重点实验室 |
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基金项目: | 贵州省科学技术基金(自然科学)(黔科合基础-ZK[2022]一般093); |
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摘 要: | 旨在对羊口疮病毒(ORFV)ORFV113蛋白进行转录动力学分析、真核表达及亚细胞定位研究。使用DNAStar软件对ORFV-JS株ORFV113基因进行序列比对分析;在阿糖胞苷(Arac)存在(Arac+)或不存在(Arac-)的情况下,于ORFV感染Hela细胞后多个时间点(2,4,6,12,24 h)收获细胞,提取细胞总RNA,逆转录PCR(RT-PCR)扩增ORFV113基因,确定ORFV113的动态转录水平;以ORFV-JS株基因组为模板,PCR扩增ORFV113基因,将其亚克隆到真核表达载体pEGFP-N1中,构建pEGFP-ORFV113重组质粒,经酶切、测序鉴定正确后,使用脂质体Lipofectamine 3000瞬时转染pEGFP-N1质粒和pEGFP-ORFV113重组质粒至HEK293细胞,通过Western Blotting鉴定ORFV113-EGFP融合蛋白的表达;将pEGFP-N1质粒和pEGFP-ORFV113重组质粒瞬时转染Hela细胞,24 h后使用Hoechst 33342对细胞核染色,倒置荧光显微镜下观察ORFV113蛋白的亚细胞定位。结果表明,O...
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关 键 词: | 羊口疮病毒 ORFV113蛋白 转录动力学 真核表达 亚细胞定位 |
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