鳜弹状病毒糖蛋白在杆状病毒表达系统中的表达与鉴定

近年来，鳜弹状病毒引起的病害频发，该病毒传播快，致病性强，是引起鳜病害的主要病原之一。鳜弹状病毒基因组编码5个结构蛋白，其中糖蛋白G是病毒表面的主要抗原，为实现该抗原蛋白的大量表达，利用分子克隆技术将鳜弹状病毒糖蛋白G片段插入杆状病毒穿梭载体pFastBac1中转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞后，筛选阳性克隆获得重组转移载体pFastBac-G,再将其转化至大肠杆菌DH10Bac感受态细胞，经蓝白斑与抗性筛选后获取重组杆粒rBacmid-G,随后利用脂质体转染法将重组杆粒转染Sf9昆虫细胞制备重组杆状病毒。将获取到的P3代重组病毒感染Sf9昆虫细胞进行重组蛋白的SDS-PAGE检测，成功表达后利用镍离子亲和层析柱纯化目的蛋白，随后对重组蛋白进行Western blot鉴定，结果显示在大于50 ku处有一条特异性条带，而对照组无条带，表明制备的抗原能与抗体特异性结合。结果表明，鳜弹状病毒糖蛋白G在杆状病毒表达系统成功表达。本试验结果可为鳜弹状病毒糖蛋白G疫苗的研发和大规模生产提供技术支撑。