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| 水流动力学基因免疫制备猪Ⅱ型圆环病毒核衣壳蛋白高效价抗血清 | |
| 引用本文： | 樊宝良,张瑾,代红星,黄培华.水流动力学基因免疫制备猪Ⅱ型圆环病毒核衣壳蛋白高效价抗血清[J].农业生物技术学报,2012,20(11). |
| 作者姓名： | 樊宝良 张瑾 代红星 黄培华 |
| 作者单位： | 1. 河北农业大学动物科技学院,保定071001;河北工程大学农学院,邯郸056038 2. 河北农业大学动物科技学院,保定071001;河北科技师范学院生命科技学院,秦皇岛066004 3. 河北农业大学动物科技学院,保定,071001 4. 河北工程大学现代教育技术中心,邯郸,056038 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金项目，国家重大专项目，国家高技术研究发展计划(863)项目 |
| 摘 要： | 为了建立一个简捷有效的抗血清的制备方法,本研究选用猪Ⅱ型圆环病毒核衣壳蛋白基因,使用水流动力学基因免疫的方法制备高效价抗血清的可行性.应用无内提取试剂盒制备猪Ⅱ型圆环病毒核衣壳蛋白基因真核表达载体pcDNA-Cap的无内毒素质粒.将该质粒使用水流动力学尾静脉注射法对小鼠(Mus musculus)进行基因免疫,重复免疫5次后采血收集血清;以原核表达获得的N末端去除了核定位序列的猪圆环病毒核衣壳蛋白表达产物作为抗原蛋白,以制备的小鼠血清作为一抗进行酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot检测.结果显示,应用水流动力学尾静脉注射法获得抗血清稀释5000倍通过Western blot至少能够检测到10 ng的抗原蛋白,ELISA分析表明,其效价可达到1∶1000000,说明获得的抗血清具有很好的效价水平.这一研究为猪Ⅱ型圆环病毒相关研究用抗体的制备提供了一个简洁有效的方法,也为猪Ⅱ型圆环病毒的防治方法的建立提供了一个值得尝试的策略. |
| 关 键 词： | 水流动力学基因导入 基因免疫 抗血清 |
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