苹果蠹蛾性信息素结合蛋白Ⅱ(CpomPBP2)基因的克隆及原核表达

【目的】获得苹果蠹蛾性信息素结合蛋白Ⅱ(CpomPBP2)基因的全长序列，并在大肠杆菌BL21(DE3)中融合表达，为探明苹果蠹蛾雌雄间的信息素交流机制奠定基础。【方法】提取苹果蠹蛾触角总RNA，利用RT-PCR、3′-RACE和5′-TAIL-PCR扩增技术获得CpomPBP2基因的全长序列；通过构建原核表达载体pET28a-CpomPBP2对CpomPBP2进行重组表达与检测；并对融合蛋白pET28a-CpomPBP2进行Western blot鉴定及可溶性鉴定。【结果】以苹果蠹蛾触角总RNA为模板合成cDNA第一链，以cDNA为模板经RT-PCR、3′-RACE和5′ TAI PCR扩增，得到CpomPBP2基因约3 000 bp的全长序列；测序结果表明，CpomPBP2基因开放阅读框长约510 bp，编码169个氨基酸，预测的成熟蛋白分子质量为16.45 ku，等电点(pI)为5.09。经SDS-PAGE电泳分析表明，融合蛋白CpomPBP2以包涵体形式存在，蛋白分子质量约为20 ku。Western blot鉴定结果显示，获得了目标蛋白CpomPBP2。用终浓度1.0 mmol/L IPTG诱导8 h后，可获得大量融合蛋白。【结论】获得CpomPBP2的全长序列，成功构建了CpomPBP2的原核表达载体，经Western blot鉴定，CpomPBP2表达正确。