翻堆频次对奶牛粪污异位发酵床中抗生素抗性基因的影响

为了探讨翻堆次数对异位发酵床连续堆肥过程中抗生素抗性基因（ARGs）和可移动基因元件（MGEs）的影响，设置1 d翻堆1次（F1组）和2 d翻堆1次（F2组）2种条件，采用PCR技术检测堆肥过程中15种基因，包括2种四环素类（tetG、tetW）、3种磺胺类（sul1、sul2、dfrA1）、2种β-内酰胺类（blaTEM-1、fexA）、2种MLSB类（ermX、ermQ）、2种FCA类（optrA、IsaE）、1种氨基糖苷类（aac（6?）-Ib-cr）、1种整合子（intI1）及2种转座子（Tn916/1545、ISCRI）基因。PCR结果显示，2组样品中均检出11种ARGs（tetG、tetW、sul1、sul2、blaTEM-1、fexA、ermX、ermQ、optrA、IsaE、aac（6?）-Ib-cr）和3种MGEs（intI1、Tn916/1545、ISCR1），其中7种基因（tetG、tetW、sul1、sul2、blaTEM-1、ermQ、intI1）的检出率较高；F1和F2组0~5 d均检出12种，33 d和40 d分别检出1种，40 d后明显增加，表明ARGs和MGEs种类随温度的变化而改变。采用qPCR技术对检出率较高的7种基因进行检测，结果显示，F1和F2组7种目标基因的总相对丰度呈先降低后升高再降低的趋势，试验结束时较0 d分别降低82.33%和78.89%，其中tetG、tetW、sul1、blaTEM-1、ermQ、intI1的相对丰度分别降低16.51%、87.89%、54.58%、99.99%、97.80%、59.29%和64.32%、99.46%、50.91%、99.29%、82.22%、99.92%。结果表明，异位发酵床降解粪污高温期可减少ARGs种类和丰度，且2 d翻堆1次对大部分ARGs的去除效果更好。

Effects of stacking frequency on antibiotic resistance genes in ectopic fermentation bed for manure and sewage of dairy cows