猪圆环病毒2型Cap蛋白特异性双价纳米抗体原核表达及活性鉴定

以猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白VHH_(cap)基因为模板,通过PCR分别克隆下游片段VHH_(down)和带(G_4S)_3-linker接头序列的上游片段VHH_(up),通过两步酶切连接反应,将VHH_(down)片段插入到pCold-SUMO载体中构建VHH_(down)-pCold-SUMO重组质粒,再将VHH_(up)片段插入到构建成功的VHH_(down)-pCold-SUMO重组质粒中,构建双价单特异性纳米抗体原核重组表达质粒biVHH_(cap)-pCold-SUMO,转化宿主菌E.coli BL21(DE3)后用IPTG进行诱导表达,表达产物经Ni~(2+)亲和层析柱纯化并进行SDS-PAGE鉴定;通过间接ELISA方法测定纯化后的双价纳米抗体重组蛋白biVHH_(cap)的效价水平,并与相同浓度的单价纳米抗体蛋白VHH_(cap)的ELISA效价进行比较分析。结果表明,重组表达质粒biVHH_(cap)-pCold-SUMO构建正确,Cap蛋白双价单特异性纳米抗体重组蛋白在原核表达系统中以可溶性形式表达,分子质量约为45 ku;该双价纳米抗体与其单价组分相比,ELISA抗体效价提高约20倍,Cap蛋白双价纳米抗体的制备为PCV2的抗原检测和PCV2相关疾病的防控提供了新型候选抗体工具。