调控表达LacI蛋白的猪霍乱沙门氏杆菌C500Δasd株的构建 |
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引用本文: | 许可,刘晶,高兴,胡译文,杨桂连,王春凤,姜延龙.调控表达LacI蛋白的猪霍乱沙门氏杆菌C500Δasd株的构建[J].黑龙江畜牧兽医,2019(21). |
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作者姓名: | 许可 刘晶 高兴 胡译文 杨桂连 王春凤 姜延龙 |
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作者单位: | 吉林农业大学动物科学技术学院/吉林省动物微生态制剂工程研究中心/动物生产与产品质量安全教育部重点实验室 |
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摘 要: | 为了构建具有asd基因缺失和LacI蛋白表达调控的猪霍乱沙门氏杆菌C500株,试验以猪霍乱沙门氏杆菌C500株为载体,对其基因组进行改造,使沙门氏杆菌asd基因缺失,随后将araC PBADLacI序列置于其中,构建包含araC PBAD-LacI基因表达框的猪霍乱沙门氏杆菌C500Δasd基因突变株以及包含Ptrc启动子的EGFP表达质粒pYA4514-EGFP,并验证是否有LacI蛋白表达。结果表明:试验成功构建出包含araC PBAD-LacI基因表达框的猪霍乱沙门氏杆菌C500Δasd基因突变株,以及包含Ptrc启动子的EGFP表达质粒pYA4514-EGFP; Western-blot检测验证了突变菌在阿拉伯糖存在的条件下可大量表达LacI蛋白,而当pYA4514-EGFP质粒上的Ptrc启动子受到抑制时,EGFP蛋白不表达;用IPTG诱导后可以消除LacI对Ptrc启动子的抑制作用,EGFP蛋白表达。说明试验成功构建了调控表达LacI蛋白的猪霍乱沙门氏杆菌C500Δasd基因突变株。
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