| PiggyBac转座子介导关岭牛UCP3基因启动子重组质粒的构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 陈伟,许厚强,陈祥,杨涛,吴雨,黄明捷,卢贤君.PiggyBac转座子介导关岭牛UCP3基因启动子重组质粒的构建与鉴定[J].黑龙江畜牧兽医,2019(15). |
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| 作者姓名： | 陈伟 许厚强 陈祥 杨涛 吴雨 黄明捷 卢贤君 |
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| 作者单位： | 贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室;贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室;贵州大学动物科学学院 |
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| 摘 要： | 为了构建以PiggyBac(PB)转座子为载体元件,绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因,含UCP3基因启动子的PiggyBac转座子二元系统PB-513B-UCP3,并验证其转座活性,试验采用PCR技术扩增获得UCP3基因启动子,分别通过T4 DNA连接酶与质粒PB-513B-1和pEGFP-N3连接,构建重组质粒PB-513B-1-UCP3和pEGFP-N3-UCP3-pro;用脂质体法将质粒pEGFP-N3、重组质粒pEGFP-N3-UCP3-pro和PB-513B-1-UCP3以及PiggyBac转座子二元系统分别转染至小鼠成肌细胞C2C12中,检测其在小鼠成肌细胞C2C12中的表达情况。结果表明:PCR扩增得到大小为1 080 bp的单一目的条带;经酶切和测序鉴定,成功构建重组质粒PB-513B-1-UCP3和pEGFP-N3-UCP3-pro,PiggyBac转座子二元系统的阳性克隆数明显多于重组质粒PB-513B-1-UCP3和pEGFP-N3-UCP3-pro的克隆数。说明试验成功构建了PiggyBac转座子介导的重组质粒PB-513B-1-UCP3及pEGFP-N3-UCP3-pro,且证实PiggyBac转座子介导的牛UCP3基因启动子在小鼠成肌细胞C2C12中具有较高的转座活性。
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