柑橘黄龙病RAA-LFD检测方法的建立

本研究基于柑橘黄龙病菌50S核糖体亚基基因的保守片段设计并合成引物和探针，通过对反应条件的优化，建立了柑橘黄龙病菌RAA-LFD检测方法。该方法可快速高效地完成柑橘黄龙病菌检测，灵敏度可达到10 copies/μL；特异性试验结果显示，除柑橘黄龙病菌基因组呈阳性外，大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、胸膜肺炎放线杆菌、单核细胞增生李斯特菌、支气管败血波氏杆菌、沙门氏菌均为阴性，特异性良好。利用该方法检测102份柑橘叶样本，结果显示，56份样本核酸为阳性，46份样本核酸为阴性；与荧光定量PCR法、RAA荧光法比较，RAA-LFD检测法弱阳的检出率偏低，但是RAA-LFD检测法摆脱了仪器依赖，操作更简便快速，无需电泳检测，避免了核酸扩增产物开盖污染的风险，适用于柑橘黄龙病菌的快速检测，适合在基层使用。