IPMA筛选猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体方法研究 |
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引用本文: | 杨艳艳,乔松林,李睿,郭军庆,李青梅,滕蔓,王丽,赵东,李学伍,邓瑞广,张改平.IPMA筛选猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体方法研究[J].华北农学报,2019,34(3). |
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作者姓名: | 杨艳艳 乔松林 李睿 郭军庆 李青梅 滕蔓 王丽 赵东 李学伍 邓瑞广 张改平 |
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作者单位: | 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室,河南郑州,450002;河南省农业科学院动物免疫学重点实验室,河南郑州 450002;河南农业大学牧医工程学院,河南郑州 450002 |
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基金项目: | 国家重点研发计划;国家自然科学基金 |
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摘 要: | 为了得到一种能够高通量检测细胞培养物的方法,并将其用于筛选特异性强、敏感度高的抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)单克隆抗体。用每孔能感染约100个细胞的病毒量接种单层覆盖96孔板的Marc-145细胞,12 h后用含3%H_2O_2的甲醇固定细胞,以制备免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)反应板。以100μL/孔的量将融合后继续培养10 d的杂交瘤细胞的培养上清加入至IPMA反应板,以辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG-HRP作为二抗,以3-氨基-9-乙基咔唑(AEC)作为显色底物,于倒置显微镜下进行观察。结果表明,共筛选出1D1、7G8等39份PRRSV单克隆抗体,这39份单抗能够使PRRSV中高致病毒株HN07-1和经典毒株BJ-4感染的Marc-145细胞被特异性染色,而对猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪流行性腹泻病毒感染的Marc-145细胞无交叉染色。因此,构建的IPMA方法能够敏感、准确地捕捉到PRRSV单克隆抗体。
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关 键 词: | 猪繁殖与呼吸综合征病毒 免疫过氧化物酶单层细胞试验 筛选 单克隆抗体 |
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