| HA标签的水稻水孔蛋白OsPIP2;7基因植物双元表达载体构建及转基因水稻的获得 |
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| 引用本文： | 王晓静,孙林静,孙玥,张融雪,李军玲,闫双勇,苏京平.HA标签的水稻水孔蛋白OsPIP2;7基因植物双元表达载体构建及转基因水稻的获得[J].华北农学报,2019,34(5). |
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| 作者姓名： | 王晓静 孙林静 孙玥 张融雪 李军玲 闫双勇 苏京平 |
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| 作者单位： | 天津市农作物研究所 天津市农作物遗传育种重点实验室,天津,300384;天津市农作物研究所 天津市农作物遗传育种重点实验室,天津,300384;天津市农作物研究所 天津市农作物遗传育种重点实验室,天津,300384;天津市农作物研究所 天津市农作物遗传育种重点实验室,天津,300384;天津市农作物研究所 天津市农作物遗传育种重点实验室,天津,300384;天津市农作物研究所 天津市农作物遗传育种重点实验室,天津,300384;天津市农作物研究所 天津市农作物遗传育种重点实验室,天津,300384 |
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| 基金项目： | 转基因生物新品种培育重大专项;国家重点研发计划"七大作物育种"重点专项;天津市自然科学基金项目 |
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| 摘 要： | 为研究水稻水孔蛋白OsPIP2;7基因在非生物胁迫中的生物学功能,根据OsPIP2;7基因序列设计特异性引物,以水稻品种中花11的三叶龄叶片RNA反转录的cDNA第一链为模板,克隆OsPIP2;7。采用嵌套PCR的方法,将3×HA标签的碱基序列连接在去除终止子OsPIP2;7基因序列的3′端,然后将此核酸片段插入到植物双元表达载体pHB中,构建pHB-OsPIP2;7-3×HA载体。以中花11成熟胚愈伤组织为材料,采用农杆菌介导的方法进行遗传转化,经过在含有潮霉素的培养基上筛选和分化,获得阳性转化子。提取转基因植株的DNA,进行潮霉素阳性植株的筛选。将阳性植株进行RNA表达检测,获得OsPIP2;7基因表达量上升的转基因阳性植株。为了检测转基因植株中OsPIP2;7蛋白的表达情况,提取OsPIP2;7基因表达上升的转基因植株膜蛋白后,用HA抗体进行杂交的Western-blot检测结果显示,OsPIP2;7-HA蛋白在转基因阳性植株体内过量表达。获得的过表达OsPIP2;7转基因新材料,将为研究OsPIP2;7基因的生物学新功能提供试验基础。
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| 关 键 词： | 水稻 水孔蛋白 HA标签 蛋白表达 |
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