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| 真鲷虹彩病毒实时定量PCR检测方法的建立与应用 | |
| 作者姓名： | 赵玉然 谭乐义 刘荭 赵巍 梁成珠 史秀杰 徐彪 朱来华 何俊强 岳志芹 |
| 作者单位： | 1. 山东出入境检验检疫局技术中心,青岛,266002 2. 深圳出入境检验检疫局,水生动物疫病国家重点实验室,518010 |
| 基金项目： | 国家质量监督检验检疫总局科研项目，质检总局公益性项目 |
| 摘 要： | 以真鲷虹彩病毒(Red-sea bream iridovirus,RSIV)主要衣壳蛋白(Major capsid protein,MCP)的基因保守片段为靶序列,利用Primer Express 3.0软件设计定量PCR引物,建立了RSIV的SYBR Green I实时定量PCR检测方法.将RSIV MCP基因连接pMD18-T载体,构建重组质粒,经过梯度稀释后作为标准品,根据标准品拷贝数(X)与Ct值的关系绘制了标准曲线,为Ct=-3.184 1gX+40.270,相关系数R2=0.996 9.熔解曲线分析表明,定量PCR产物的Tm值为82.5℃.该方法的检测限为2.20×102拷贝/反应,对流行性造血器官坏死病毒、淋巴囊肿病毒、蛙病毒3、甲鱼虹彩病毒都没有扩增反应,具有特异性.利用该方法对84批海水鱼类(石鲽、大菱鲆、鲈鱼)进行检测,其中5批鱼样品感染RSIV,并利用标准曲线对病毒含量进行了定量分析. |
| 关 键 词： | 真鲷虹彩病毒 实时定量PCR 衣壳蛋白基因 SYBR Green I |
| 收稿时间： | 2010/5/6 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2010/6/29 0:00:00 |
Development and application of a real-time PCR assay for the detection of red-sea bream iridovirus |
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| Authors: | ZHAO Yu-ran TAN Le-yi LIU Hong ZHAO Wei LIANG Cheng-zhu SHI Xiu-jie XU Biao ZHU Lai-hua HE Jun-qiang YUE Zhi-qin |
| Abstract: | |
| Keywords: | |
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