北京油鸡β-防御素-7基因原核表达质粒的构建及表达

为了研究β-防御素-7基因在大肠杆菌中的原核表达,试验以pGEM-T-GAL-7为模板,经PCR扩增GAL-7基因的编码序列,克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,转化E.coliDH5α并在E.coliBL21(DE3)中诱导表达,并对目的蛋白进行SDS-PAGE电泳和Western-blot鉴定。结果表明:重组质粒pGEX-4T-1-GAL-7经PCR及酶切测序鉴定,证明质粒构建正确;重组质粒经诱导表达后,可表达出分子质量约为33ku的GAL-7蛋白;表达产物以融合蛋白形式存在,在37℃条件下诱导4h表达量最高,最佳的诱导浓度为0.1mmol/L。