荧光定量RT-PCR法检测运输应激猪热休克蛋白mRNA转录水平 |
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引用本文: | 李玉保,鲍恩东,王志亮,赵茹茜.荧光定量RT-PCR法检测运输应激猪热休克蛋白mRNA转录水平[J].中国农业科学,2006,39(1):187-192. |
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作者姓名: | 李玉保 鲍恩东 王志亮 赵茹茜 |
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作者单位: | 1. 南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室,南京,210095;农业部动物检疫所,青岛,266032 2. 南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室,南京,210095 3. 农业部动物检疫所,青岛,266032 |
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基金项目: | 中国科学院资助项目;中-德合作项目 |
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摘 要: | 【目的】探讨应激时热休克蛋白mRNA转录水平的变化。【方法】根据HSP90、HSP70和GAPDH mRNA序列,设计并合成引物,将PCR扩增的基因片段克隆到pGEM-T载体,重组质粒经筛选、鉴定,体外转录出RNA,梯度稀释作为阳性模板,用于标准曲线的制定和样品检测,建立了一步法实时荧光定量RT-PCR技术平台,并用于检测长途运输猪心脏和肝脏中HSP70及HSP90 mRNA转录水平的改变。【结果】经1、2、4、6和10 h的运输应激后,组织中HSP70 mRNA的转录水平随着运输应激时间的延长一直呈现出上升的趋势,运输应激到10 h时HSP70 mRNA的转录水平升到最高,肝脏和心脏组织中HSP70 mRNA的转录水平分别为对照组的2.5和4.1倍;HSP90 mRNA的转录水平则随着运输应激时间的延长呈下降趋势。【结论】运输应激可以影响HSP mRNA转录水平的变化,并且对不同家族的HSP mRNA转录水平的影响不同;HSP70 mRNA的转录水平有望成为猪运输应激的判定指标之一。
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关 键 词: | 猪 热休克蛋白 SYBR Green I 荧光定量PCR 运输应激 |
收稿时间: | 01 17 2005 12:00AM |
修稿时间: | 2005-01-172005-10-31 |
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