槟榔黄叶病毒1外壳蛋白的互作蛋白筛选

为明确槟榔黄化病致病机理，探究槟榔黄叶病毒1 (areca palm leaf yellowing virus 1, APLYV 1)病毒与宿主蛋白之间相互作用的机制，本研究以槟榔叶片为材料，构建槟榔cDNA酵母双杂交文库，以APLYV 1的外壳蛋白(coat protein, CP)为诱饵，构建诱饵载体pGBKT7-CP，采用酵母双杂交技术，从槟榔cDNA文库中筛选与其互作的蛋白。结果表明，成功构建槟榔酵母文库，文库容量达1.1×10⁷以上，重组率为100%，插入片段平均长度>1 000 bp。成功构建诱饵载体pGBKT7-CP，通过自激活实验检验，阳性对照在四缺培养基平板上能正常长菌且显蓝，阴性对照和实验组在二缺培养基平板上能正常长菌，在三缺和四缺培养基平板上未长菌，表示构建成功的重组诱饵载体无自激活活性，可用于筛库实验。共筛选出13个阳性克隆，经NCBI网站与槟榔转录组库进行比对，最终得到10个候选槟榔蛋白，包含sHSP (small Heat Shock Protein)与DnaJ蛋白等。选择DnaJ蛋白，通过理化性质分析和蛋白二级结构预测，发现该槟...