口蹄疫病毒非结构蛋白3B基因的克隆表达及3B-ELISA鉴别诊断方法的初步建立

从口蹄疫病毒（foot—and—mouth disease virus，FMDV）细胞培养物中提取总RNA，经一步法RT—PCR获得了长约230bp的3B基因片段，将PCR产物连接到pMD-18T载体上并测序，用BamH Ⅰ与Hind Ⅲ双酶切后，将3B基因融合到pGEX—KG载体上形成表达质粒pGEX—KG—3B，转化到BL21（DE3）中在27C诱导表达，将表达产物进行SDS—PAGE和蛋白质斑点ELISA。结果表明3B基因主要以可溶形式高效表达，表达产物具有免疫原性。以纯化的表达产物为抗原建立了间接酶联免疫吸附试验（I-ELISA）。方阵滴定其最佳包被浓度是6．1μg／孔，最佳血清稀释倍数为1：80，通过测定36份FMDV阴性血清，确定了该方法的阳性判定标准。结果表明，该方法特异性强、重复性好；用3B—ELISA方法与美国联合生物医学公司（UBI）生产的合成肽检测试剂盒UBI FMDV NS-ELISA对比检测44份血清样品，符合率为93．1％。证明3B—ELISA方法可用于口蹄疫的鉴别诊断。

Cloning and Expression of the Nonstructural Protein 3B Gene of Foot-and Mouth Disease Virus and Development of 3B-ELISA for Differential Diagnosis