内生真菌Alternaria oxytropis OW7.8中酵母氨酸还原酶基因启动子克隆表达及酶学性质

本研究利用TAIL-PCR法克隆小花棘豆内生真菌A. oxyrtropis OW7.8 sac启动子序列，并进行功能元件预测；构建pBARGPEI-mCherry-sac启动子表达载体，将该表达载体转化OW7.8原生质体，经再生培养得sac启动子转录激活功能株。提取分离A. oxyrtropis OW7.8中的Sac，对其进行酶活力、最适pH值、最适温度、K_m和V_max研究。结果表明：荧光显微镜下检测到转录激活功能株有明亮红色荧光，而野生株OW7.8无红色荧光，sac启动子驱动了红色荧光蛋白基因的转录。Sac逆向反应的最适pH值为7.0，最适温度为24℃；以酵母氨酸为底物的K_m=0.142 mmol/L、V_max=0.067μmol/min，以NADP⁺为底物的K_m=0.457 mmol/L、V_max=0.235μmol/min。为深入研究该内生真菌SW生物合成途径与调控机制提供了重要基础数据。