| 随机突变对扩展青霉脂肪酶最适作用温度的改善 |
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| 引用本文： | 胡长浩,邹有土,刘燕雅,冯蔚宗,林琳.随机突变对扩展青霉脂肪酶最适作用温度的改善[J].饲料工业,2009,30(6). |
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| 作者姓名： | 胡长浩 邹有土 刘燕雅 冯蔚宗 林琳 |
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| 作者单位： | 福建师范大学生命科学学院,350108 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，福建省自然科学基金，福建省科技创新平台建设计划项目 |
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| 摘 要： | 利用error-prone PCR和staggered extension process(StEP)相结合的方法对扩展青霉脂肪酶(PEL)进行定向进化,构建含有随机突变基因的重组质粒pPIC3.5K-lip-mutantx,电转化引入毕赤酵母GS115中,进行异源表达。高通量筛选获得一株最适作用温度比野生型提高了5℃的突变株。15%的SDS-PAGE表明突变体分子量与野生型一致,约为28kDa。基因测序结果表明,突变体第270位丙氨酸变为苏氨酸,后者是氢键的供体,能形成具有稳定空间结构的氢键,使酶结构更加稳定,在高温下更适于与底物结合。
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| 关 键 词： | 扩展青霉脂肪酶 随机突变 最适作用温度 |
Improvement of the optimum temperature of penicillium expansum lipase by random mutation |
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