牛病毒性腹泻-黏膜病病毒双抗体夹心Dot-ELISA检测方法的建立

采用辛酸-硫酸铵法提取兔抗牛病毒性腹泻-黏膜病毒(BVDV)高免血清中的免疫球蛋白IgG,辣根过氧化物酶标记提纯后IgG,建立了检测BVDV抗原的双抗体夹心斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)法。结果显示,抗体最佳包被量为300μg/mL,酶标记抗体的最适浓度为1∶50倍稀释,以5%牛血清作为封闭液、封闭45min效果最佳,抗原最小检出量是1.34μg/mL。应用建立的检测方法对河北省内78份腹泻奶牛血样进行了检测,阳性检出率为57.69%;经卡方检验分析,建立的Dot-ELISA与琼脂扩散(AGP)法相比较,阳性检出率差异显著。试验证明,该方法具有简便快速、特异性强、重复性高的优点,适合于基层兽医的检测诊断。