| 牛支原体武威株脂蛋白P48基因的克隆、原核表达及亚细胞定位 |
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| 引用本文： | 胡国明,邢小勇,李娜,苏炜德,温峰琴,项海涛,胡永浩,包世俊.牛支原体武威株脂蛋白P48基因的克隆、原核表达及亚细胞定位[J].甘肃农业大学学报,2016(2):1-7. |
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| 作者姓名： | 胡国明 邢小勇 李娜 苏炜德 温峰琴 项海涛 胡永浩 包世俊 |
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| 作者单位： | 甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州,730070 |
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| 基金项目： | 甘肃省自然科学基金项目“新生犊牛传染性肺炎病原的分离、鉴定及快速诊断方法研究”(1308RTZA235) |
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| 摘 要： | 【目的】验证牛支原体P48蛋白在细胞中的位置,并为后续功能的研究奠定基础.【方法】运用Overlap PCR扩增获得点突变后的牛支原体武威分离株P48基因,并将其克隆至pGEM-T Easy,将测序正确的质粒克隆至表达载体pET-28a中,构建原核表达质粒pET-P48,表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),并在IPTG诱导下成功获得融合蛋白表达产物rMbP48,大小约为51ku.重组蛋白纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体.在分离牛支原体膜蛋白的基础上应用Western-blot及间接ELISA对P48蛋白在细胞中的分布进行分析.【结果】P48蛋白主要存在于牛支原体的膜分离相.全菌免疫荧光试验进一步证实脂蛋白P48位于牛支原体的膜表面.【结论】牛支原体P48蛋白是存在于牛支原体表面的一种具有免疫原性的脂蛋白.本研究为进一步研究P48蛋白的生物学特性及建立高效的牛支原体诊断方法奠定了基础.
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| 关 键 词： | 牛支原体 P48 基因克隆 原核表达 亚细胞定位 |
Gene cloning,prokaryotic expression and subcellular iocalization of lipoprotein P48 of mycoplsama bovis Wuwei strain |
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