| 产青霉素G酰化酶工程菌的构建 |
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| 引用本文： | 邵威平,吴卓颖,张永玲,杨富民,田常庆. 产青霉素G酰化酶工程菌的构建[J]. 甘肃农业大学学报, 2016, 0(1): 132-137. DOI: 10.3969/j.issn.1003-4315.2016.01.023 |
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| 作者姓名： | 邵威平 吴卓颖 张永玲 杨富民 田常庆 |
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| 作者单位： | 1. 甘肃农业大学食品科学与工程学院,甘肃 兰州,730070;2. 临夏州人民医院,甘肃 临夏,731100;3. 甘肃农业大学生命科学技术学院,甘肃 兰州,730070 |
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| 基金项目： | 甘肃省科技重大专项(1102NKDN058) |
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| 摘 要： | 【目的】构建表达巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶(PGA)的枯草芽孢杆菌工程菌.【方法】首先采用PCR从巨大芽孢杆菌基因组DNA中扩增出长度为2 409bp的PGA编码基因,经琼脂糖凝胶电泳检测及DNA测序验证后,再将其与枯草芽孢杆菌穿梭表达载体PMA5(7.5kb)连接后导入到枯草芽孢杆菌10397中表达,并通过聚丙烯酰胺琼脂糖凝胶电泳(SDS-PAGE)检验其能否表达.【结果】构建了9.9kb大小的PMA5-PGA重组质粒,经SDS-PAGE验证,青霉素酶基因在枯草芽孢杆菌10 397中作出表达.基因工程菌在37℃、220r/min培养36h发酵条件下,所产PGA的酶活可达到12.426U/mL,比巨大芽孢杆菌发酵产PGA酶提高了5.26倍.【结论】所构建的枯草芽孢杆菌是青霉素G酰化酶的高产工程菌.
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| 关 键 词： | 青霉素G酰化酶 PCR 重组表达 基因工程菌 |
Construction of penicillin G acylase-producing engineering strain |
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