| 猪α、γ干扰素的原核表达、纯化及抗病毒活性初步研究 |
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| 作者姓名： | 赵伟鸽 单同领 朱建国 林源 华修国 |
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| 作者单位： | 1. 上海交通大学,农业与生物学院,上海市兽医生物重点实验室,上海,200240
2. 西北农林科技大学,陕西,712100 |
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| 摘 要： | 提取猪白细胞DNA、猪脾脏RNA,特异性引物扩增猪IFN-α、IFN-γ基因,将IFN-α和IFN-γ基因分别插入原核表达载体pET-30构建重组表达质粒pET-30-IFN-α和pET-30-IFN-γ,转化大肠杆菌B121,在IPTG诱导下表达猪IFN-α及IFN-γ,SDS-PAGE分析重组表达蛋白;用细胞病变抑制法检测重组表达蛋白的抗病毒活性.结果表明成功构建重组表达质粒pET-30-IFN-α和pET-30-IFN-γ;SDS-PAGE可检测到相对分子质量为21.3 Ku和19.4 Ku的蛋白条带,表达产物主要以包涵体形式存在;经Ni2+-NTA亲和层析纯化,获得高纯度重组蛋白;纯化的猪IFN-α和IFN-γ抗星状病毒复制的活性分别为3.15×103 U·mg-1和2.48×103 U·mg-1.
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| 关 键 词： | 猪α、γ干扰素 原核表达 纯化 抗病毒活性 |
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