新疆多浪羊IL-1β基因原核表达载体的构建与表达 |
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作者姓名: | 曾国航 徐宏伟 李莲瑞 等 |
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作者单位: | 塔里木大学 生命科学学院,塔里木大学 生命科学学院,塔里木大学 动物科学学院;新疆兵团塔里木畜牧科技重点实验室 |
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基金项目: | 国家自然科学基金项目“棉酚对新疆多浪羊白细胞介素表达的影响研究”(30960277);创新群体项目“南疆地区羊标准化养殖的群发病防控及预警响应机制研究”(TDZKCX201401) |
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摘 要: | 【目的】构建新疆多浪羊IL-1β基因编码区的原核表达载体,在大肠杆菌中进行诱导表达,为进一步研究IL-1β蛋白的结构功能奠定基础。【方法】从含质粒pMD-18T-IL-1β的大肠杆菌DH5α中获取IL-1β基因,与pET-28b质粒DNA连接,构建原核表达载体pET-28b-IL-1β。先将其转化到克隆载体E.coli DH5α感受态细胞中大量拷贝,经菌液PCR和EcoRⅠ、XhoⅠ双酶切鉴定后,提取pET-28b-IL-1β质粒转化到表达载体E.coli BL21(DE3)中,再次进行菌液PCR和EcoRⅠ、XhoⅠ双酶切鉴定。将阳性单克隆接种于LB液体培养基,以终浓度为1mmol/L IPTG进行诱导,用SDS-PAGE电泳检测IL-1β蛋白的表达及存在形式,通过Western blotting验证表达产物是否为目的蛋白。【结果】成功构建了新疆多浪羊IL-1β基因的原核表达载体pET-28b-IL-1β,该载体经诱导后表达出融合蛋白,分子质量为32.4ku,主要以包涵体的形式表达;经Western blotting检测,带有6×His标签的融合蛋白有很好的反应原性。【结论】成功构建了新疆多浪羊IL-1β基因的原核表达载体pET-28b-IL-1β,其在大肠杆菌BL21(DE3)中经诱导后表达出分子质量约为32.4ku的IL-1β融合蛋白。
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关 键 词: | 多浪羊;IL-1β基因;原核表达 |
收稿时间: | 2015-01-28 |
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