猪流行性腹泻病毒S蛋白原核表达及其单克隆抗体制备 |
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作者姓名: | 邱永辉 周建卫 王潇宇 周琳怡 侯磊 戴贝凝 冯旭飞 刘爵 |
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作者单位: | 1. 福建农林大学动物科学学院(蜂学学院);2. 扬州大学兽医学院 |
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基金项目: | 江苏省基础研究计划(自然科学基金)(BK20210807);;江苏省高校重点学科建设项目; |
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摘 要: | 本研究以猪流行性腹泻病毒(PEDV)全基因组为模板,利用RT-PCR方法扩增PEDV S基因的亲水区,将其克隆至pMAl-c2E原核表达载体,获得重组质粒pMAl-c2E-PEDV-S。经EcoRⅠ/SalⅠ双酶切测序鉴定后,转化BL21菌,经IPTG诱导,成功表达了约74 kDa的重组蛋白MBP-PEDV-S,亲和层析法纯化重组蛋白。将重组蛋白免疫3只健康的6~8周龄雌性BALB/c小鼠,将小鼠脾脏B淋巴细胞与SP2/0瘤细胞融合,采用间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞株,获得了4株能稳定分泌抗PEDV S蛋白抗体的杂交瘤细胞株1B11、1B10、1C8、3L3,其腹水效价都高于1∶100 000。获得的4株单克隆抗体与PEDV经IFA和Western blot检测,结果显示均具有良好的反应性。而且3株单克隆抗体重链为IgG2a,1株重链为IgG2b;3株轻链为Kappa,1株轻链为Lambda。本研究表达了PEDV S蛋白并制备了单克隆抗体,为研究S蛋白的结构和功能提供了条件,为揭示PEDV致病机制奠定了基础。
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关 键 词: | 猪流行性腹泻病毒 S蛋白 原核表达 单克隆抗体 |
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