猪流行性腹泻病毒S蛋白原核表达及其单克隆抗体制备

本研究以猪流行性腹泻病毒(PEDV)全基因组为模板，利用RT-PCR方法扩增PEDV S基因的亲水区，将其克隆至pMAl-c2E原核表达载体，获得重组质粒pMAl-c2E-PEDV-S。经EcoRⅠ/SalⅠ双酶切测序鉴定后，转化BL21菌，经IPTG诱导，成功表达了约74 kDa的重组蛋白MBP-PEDV-S，亲和层析法纯化重组蛋白。将重组蛋白免疫3只健康的6～8周龄雌性BALB/c小鼠，将小鼠脾脏B淋巴细胞与SP2/0瘤细胞融合，采用间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞株，获得了4株能稳定分泌抗PEDV S蛋白抗体的杂交瘤细胞株1B11、1B10、1C8、3L3，其腹水效价都高于1∶100 000。获得的4株单克隆抗体与PEDV经IFA和Western blot检测，结果显示均具有良好的反应性。而且3株单克隆抗体重链为IgG2a，1株重链为IgG2b；3株轻链为Kappa，1株轻链为Lambda。本研究表达了PEDV S蛋白并制备了单克隆抗体，为研究S蛋白的结构和功能提供了条件，为揭示PEDV致病机制奠定了基础。