稳转hTERT绵羊睾丸细胞系的建立

羊睾丸原代细胞的体外培养是探究牛羊病毒致病机理的重要材料，实际科研工作中常受困于此类细胞传代性差、性质不稳定等缺点。外源性导入人端粒酶逆转录酶基因(hTERT)可以促使端粒酶活性的表达，延长细胞体外培养寿命是一种有效建立细胞永生化的方法。本试验中，通过RT-PCR获得hTERT。利用同源重组的技术，成功的构建了hTERT的真核表达质粒和慢病毒质粒。利用慢病毒表达系统，建立了稳转hTERT绵羊的睾丸细胞系。间接免疫荧光和蛋白免疫印迹试验研究结果均显示，hTERT基因已成功整合进入绵羊睾丸基因组中并稳定表达。第30代次的羊睾丸细胞生长较快，性状较稳定，表明已成功构建了具有永生化特性的绵羊睾丸细胞系，为草食动物病毒的相关研究提供重要的细胞模型。