| 猪γ干扰素的基因克隆、改造、表达及活性测定 |
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| 引用本文： | 曹瑞兵,周斌,陈德胜,陈溥言.猪γ干扰素的基因克隆、改造、表达及活性测定[J].南京农业大学学报,2003,26(2):71-75. |
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| 作者姓名： | 曹瑞兵 周斌 陈德胜 陈溥言 |
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| 作者单位： | 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,江苏,南京,210095 |
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| 摘 要： | 提取经ConA诱导培养的猪外周血白细胞总RNA ,RT -PCR扩增出猪IFN -γ基因并克隆到pGEM -T -easy载体 ,测序结果表明扩增片段是含有信号肽的猪IFN -γ的完整基因。设计 1对引物亚克隆猪IFN -γ成熟蛋白基因并对其5′端前 2个稀有密码子进行大肠杆菌偏嗜性改造。经测序鉴定后插入原核表达载体pRLC ,并实现在大肠杆菌中的高效表达。表达产物以包涵体形式存在 ,经 7mol·L-1盐酸胍的变性液溶解及 0 5mol·L-1盐酸胍复性液复性处理 ,表达产物进行脱盐、凝胶层析纯化。细胞病变抑制法测定结果表明 ,重组猪IFN -γ具有较高的干扰素活性 ,约为 4 5× 10 6U·mg-1。
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| 关 键 词： | 猪γ干扰素 基因改造 原核表达 分离纯化 |
| 文章编号： | 1000-2030(2003)02-0071-05 |
| 修稿时间： | 2002年9月25日 |
Molecular cloning, gene modification, expression and activity determination of porcine IFN-γ |
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| CAO Rui bing,ZHOU Bin,CHEN De sheng,CHEN Pu yan.Molecular cloning, gene modification, expression and activity determination of porcine IFN-γ[J].Journal of Nanjing Agricultural University,2003,26(2):71-75. |
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| Authors: | CAO Rui bing ZHOU Bin CHEN De sheng CHEN Pu yan |
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| Institution: | CAO Rui bing,ZHOU Bin,CHEN De sheng,CHEN Pu yan * |
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