| 人工锌指蛋白文库的构建 |
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| 引用本文： | 周 罡,张 龙,刘中天,等. 人工锌指蛋白文库的构建[J]. 西北农林科技大学学报(自然科学版), 2014, 42(7): 1-7 |
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| 作者姓名： | 周 罡 张 龙 刘中天 等 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学 动物科技学院;西北农林科技大学 动物科技学院;西北农林科技大学 动物科技学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（31172186） |
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| 摘 要： | 【目的】以猪基因组为模板,扩增天然锌指,以此建立人工锌指蛋白文库,为猪基因组的定点操作及基因表达研究奠定基础。【方法】利用质粒JMB378和JMB440构建锌指文库骨架载体JMB378-ZF1-MCS,然后根据天然锌指蛋白接头序列的保守性,设计5条简并引物扩增猪基因组中的天然单锌指结构域,将其与JMB378-ZF1-MCS载体上的人工锌指ZF1中识别GGC的锌指蛋白连接,构建二锌指蛋白文库,通过酶切方式再将天然单锌指结构域插入到二锌指蛋白文库中,构建三锌指蛋白文库。测定锌指库容量及阳性率,并通过酶切和测序检测锌指库的多样性。【结果】构建了基于猪天然锌指模块的包含ZF1的三锌指蛋白文库,库容量达到1.5×106 CFU。该文库中含有一个人工锌指蛋白ZF1和2个天然型锌指蛋白,能够对基因组中所有以GGC起始的9bp靶序列进行筛选。【结论】构建了基于天然单锌指模块的三锌指蛋白文库,为构建新型锌指蛋白提供了一种可行的方法。
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| 关 键 词： | 锌指；天然锌指蛋白；文库构建 |
| 收稿时间： | 2013-05-08 |
Construction of artificial zinc finger protein libraries |
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| ZHOU Gang,ZHANG Long and LIU Zhong-tian,et al. Construction of artificial zinc finger protein libraries[J]. Journal of Northwest A&F University（Natural Science Edition）, 2014, 42(7): 1-7 |
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| Authors: | ZHOU Gang ZHANG Long LIU Zhong-tian et al |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | zinc finger nature zinc finger protein library construction |
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