| 巴东木莲DNA的提取及SRAP-PCR反应体系的正交优化止父优化 |
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| 作者姓名： | 万玉华 余璐璐 李晓玲 陈发菊 梁宏伟 何正权 |
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| 作者单位： | 三峡大学化学与生命科学学院生物技术研究中心／天然产物研究与利用湖北省重点实验室,湖北宜昌443002 |
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| 摘 要： | 研究确定了提取巴东木莲基因组DNA的方法．采用正交试验设计法对影响SRAP—PCR反应的引物浓度、TaqDNA聚合酶的用量、Mg^2＋和dNTPs浓度及PCR扩增程序中的退火温度及循环次数进行了比较、优化，同时对DNA模板浓度进行了筛选。结果表明，Mg^2＋、dNTPs、砌酶及引物的不同水平均对PCR反应结果有显著的影响。建立了巴东木莲20μL SRAP—PCR的反应体系为1xbuffer、Mg^2＋浓度为2．0mmol·L^-1、dNTPs浓度为0．25mmol·L^-1、引物浓度为0．45μmol·L^-2、Toq酶为O．5U和模板DNA40ng。适宜的扩增程序为94℃预变性1min，94℃变性1rain，33℃复性1min，72℃延伸1min，10个循环；94℃变性1min，55℃复性1min，72℃延伸1min，30个循环；最后72℃延伸5min。试验表明，该体系重复性好、稳定性强．
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| 关 键 词： | 巴东木莲 DNA提取 SRAP-PCR反应体系 正交设计 优化 |
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