| 谷氨酸棒杆菌Cgl0864基因强启动子的鉴定 |
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| 引用本文： | 张献,张玮祎,李川敏,牛树启,臧卫平,徐大庆. 谷氨酸棒杆菌Cgl0864基因强启动子的鉴定[J]. 河北农业大学学报, 2020, 43(2): 69-75. DOI: 10.13320/j.cnki.jauh.2020.0032 |
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| 作者姓名： | 张献 张玮祎 李川敏 牛树启 臧卫平 徐大庆 |
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| 作者单位： | 河北农业大学生命科学学院,河北保定 071000,河北农业大学生命科学学院,河北保定 071000,河北农业大学生命科学学院,河北保定 071000,河北省保定市竞秀公园管理处,河北保定 071000,河北省保定市龙潭公园管理处,河北保定 071000,河北农业大学生命科学学院,河北保定 071000 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;河北省留学回国人员择优资助项目 |
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| 摘 要： | 鉴定强启动子可为谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)代谢工程育种及重组蛋白生产提供高效的基因表达调控元件,但谷氨酸棒杆菌内源性强启动子的鉴定鲜有报道。本试验进行谷氨酸棒杆菌ATCC13032菌株细胞全蛋白二维电泳并对高表达蛋白质斑点进行质谱分析,选取分子量大小约为30 kDa、等电点约为4.6的斑点作为研究对象,分析其所对应蛋白编码基因的启动子。启动子预测结果表明,谷氨酸棒杆菌Cgl0864基因启动子P0864转录活性强。将强启动子Ptac-M和启动子P0864分别插入启动子探测载体pDXW-11,转化ATCC13032菌株感受态细胞,获得工程菌株C. glutamicum/pDXW-11-Ptac-M和C. glutamicum/pDXW-11-P0864。氯霉素耐受性试验结果显示,菌株C.glutamicum/pDXW-11-Ptac-M和C.glutamicum/pDXW-11-P0864的氯霉素耐受性分别为30和40μg/mL;报告蛋白CAT氯霉素酰基转移酶活性检测结果显示,C.glutamicum/pDXW-11-Ptac-M和C.glutamicum/pDXW-11-P0864菌株细胞抽提物上清液CAT蛋白氯霉素酰基转移酶比活力分别为4.50和6.12 U/mg;氯霉素乙酰基转移酶基因cat转录水平的荧光定量PCR试验检测结果显示,cat基因在启动子P0864的控制下,其转录水平是在Ptac-M控制下转录水平的1.84倍。以上结果表明,谷氨酸棒杆菌Cgl0864基因启动子P0864是强启动子。
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| 关 键 词： | 谷氨酸棒杆菌 二维电泳 强启动子 实时荧光定量PCR |
Identification of strong promoter of the Cgl0864 gene in Corynebacterium glutamicum |
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| ZHANG Xian,ZHANG Weiyi,LI Chuanmin,NIU Shuqi,ZANG Weiping,XU Daqing. Identification of strong promoter of the Cgl0864 gene in Corynebacterium glutamicum[J]. Journal of Agricultural University of Hebei, 2020, 43(2): 69-75. DOI: 10.13320/j.cnki.jauh.2020.0032 |
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| Authors: | ZHANG Xian ZHANG Weiyi LI Chuanmin NIU Shuqi ZANG Weiping XU Daqing |
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