抗鹅细小病毒NS1蛋白单克隆抗体可变区的原核表达 |
| |
作者单位: | 齐齐哈尔大学 生命科学与农林学院,黑龙江 齐齐哈尔 161006;黑龙江省抗性基因工程与寒地生物多样性保护重点实验室,黑龙江 齐齐哈尔 161006;齐齐哈尔大学 生命科学与农林学院,黑龙江 齐齐哈尔 161006;齐齐哈尔大学 计算机与控制工程学院,黑龙江 齐齐哈尔 161006 |
| |
基金项目: | 黑龙江省自然科学基金;基本科研业务费项目;基本科研业务费项目;黑龙江省领军人才梯队后备带头人资助 |
| |
摘 要: | 为了在大肠杆菌中表达抗鹅细小病毒(GPV) NS1蛋白单克隆抗体轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)基因,并测定其与NS1蛋白结合活性。对抗GPV NS1蛋白单克隆抗体VL、VH基因核苷酸序列依据大肠杆菌偏爱密码子进行优化,人工合成获得了含有可变区基因的重组质粒pUC57-VL和pUC57-VH。然后用Bam HⅠ/XhoⅠ双酶切pUC57-VL、pUC57-VH,回收340 bp的VL基因和370 bp的VH基因。目的基因通过Bam HⅠ/XhoⅠ多克隆位点分别插入至原核表达载体pET-32a,获得重组质粒pET-VL和pET-VH。重组质粒经Bam HⅠ单酶切和Bam HⅠ/XhoⅠ双酶切及测序鉴定。重组质粒分别转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导,获得了重组蛋白TRX-VL和TRX-VH的表达,分子量分别为30.3,31.4 ku。纯化后的重组蛋白能与His标签单克隆抗体发生特异性结合,鉴定结果表明,获得的纯化蛋白为目的蛋白。间接ELISA分析表明,0.4μg的TRX-VH可与25 ng的GST-NS1蛋白特异性结合而0.4μg的TRX-VL不能与各包被量的GST-NS1蛋白特异性结合,TRX-VH与GST-NS1蛋白的特异性结合可被1∶200稀释的GPV感染鹅血清完全阻断。
|
关 键 词: | 鹅细小病毒 非结构蛋白 单克隆抗体 抗体可变区 原核表达 |
本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录! |
|