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猪中性粒细胞磷酸二酯酶基因表达及活性研究
引用本文:姜代勋,陈武,谷金妮,许剑琴,于同泉,路苹,穆祥.猪中性粒细胞磷酸二酯酶基因表达及活性研究[J].中国农业科学,2007,40(6):1265-1270.
作者姓名:姜代勋  陈武  谷金妮  许剑琴  于同泉  路苹  穆祥
作者单位:1. 中国农业大学动物医学院,北京,100094;北京农学院动物科学技术系,北京,102206
2. 北京农学院动物科学技术系,北京,102206
3. 中国农业大学动物医学院,北京,100094
4. 农业应用新技术北京市重点实验室,北京,102206
5. 兽医学(中医药)北京市重点实验室,北京,102206
基金项目:国家自然科学基金;北京市科技新星计划项目;北京市属市管高校人才强教计划
摘    要: 【目的】通过对猪中性粒细胞磷酸二酯酶(PDE)基因表达、活性及特异性抑制剂实验检测,研究其存在的主要PDE亚型及在体外的活性,为探讨PDE在中性粒细胞的分布、活性变化及对cAMP、cGMP调节与中性粒细胞功能关系提供依据。【方法】采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测PDE基因在猪中性粒细胞的表达,以高效液相色谱(HPLC)检测环核苷酸在PDE反应前后的含量变化,计算PDE活性。【结果】在检测的18个PDE亚型中,PDE1B、2A、3A、3B、4A、4B、4C、4D、5A、7A、7B、8A、8B、9A、11A 共15个PDE mRNA在猪中性粒细胞表达,特异性抑制剂实验表明PDE4、PDE5分别为水解cAMP、cGMP的主要PDE亚型;cAMP/cGMP-PDE在10~40 μl范围内,与其活性存在良好的线性关系(r=0.9929/0.9992)。【结论】猪中性粒细胞至少存在15个PDE亚型,其中PDE4、PDE5为主要存在的2个亚型,PDE样品量在一定范围内与其活性存在良好的线性关系,可作为筛选PDE型中性粒细胞功能调节剂的方法。

关 键 词:中性粒细胞  磷酸二酯酶  中国实验用小型猪  高效液相色谱
收稿时间:2006-1-25
修稿时间:2006年7月19日

Study on Activity and Gene Expression of Phosphodiesterase in Porcine Neutrophils
JIANG Dai-xun,CHEN Wu,GU Jin-ni,XU Jian-qin,YU Tong-quan,LU Ping,MU Xiang.Study on Activity and Gene Expression of Phosphodiesterase in Porcine Neutrophils[J].Scientia Agricultura Sinica,2007,40(6):1265-1270.
Authors:JIANG Dai-xun  CHEN Wu  GU Jin-ni  XU Jian-qin  YU Tong-quan  LU Ping  MU Xiang
Abstract:Abstract:【OBJECTIVE】to study the main types and activity of phosphodiesterase (PDE) existed in porcine neutrophils through the examination of PDE gene expression, activity and selective inhibitor experiments for the investigation of relation between PDE distribution, activity change, adjustment on cAMP and cGMP content and neutrophil function;【METHOD】PDE gene expression was detected by RT-PCR, and PDE activity was calculated by cylic nucleotides content change examined with HPLC before and after the PDE reaction;【RESULTS】mRNAs of PDE1B, 2A, 3A, 3B, 4A, 4B, 4C, 4D, 5A, 7A, 7B, 8A, 8B, 9A, 11A were expressed in porcine neutrophils, and selective inhibitor experiments indicated PDE4 and PDE5 were respectively the main types to hydrolyze cAMP and cGMP; cAMP/cGMP-PDE in the extent of 10 µL ~ 40 µL had a good linear correlation with its activity (r=0.9929, 0.9992);【CONCLUSION】there are at least 15 PDE types existed in porcine neutrophils, in which PDE4 and PDE5 are the two main types; PDE volume has a good linear correlation with its activity, to some extent, which supply the base for the choose herbal regulators of neutrophil function of PDE type.
Keywords:Neutrophil  Phophodiesterase  China experimental miniature pig  HPLC
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