大豆疫霉菌氧化固醇结合蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化及活性鉴定

氟噻唑吡乙酮(oxathiapiprolin)是目前生产上防治植物病原卵菌病害的高活性杀菌剂，其靶标被认为是氧化固醇结合蛋白(oxysterol-binding protein, OSBP)。氧化固醇结合蛋白及其相关蛋白(OSBP-related proteins, ORPs)是一种脂质转运蛋白，保守存在于多个物种中。虽然其他部分物种的该蛋白三维结构已经被解析，然而尚未见有关植物病原卵菌中该蛋白异源表达及纯化的报道，因而限制了该蛋白的结构药理学研究及基于靶标的新型杀菌剂开发。本文旨在建立大豆疫霉菌(Phytophthora sojae, Ps)氧化固醇结合蛋白Psosbp的异源表达、纯化及活性鉴定体系。研究选取与人源OSBP序列保守的OSBP相关结构域(oxysterol-binding protein-related domain, ORD)，构建适于在大肠杆菌Escherichia coli中表达的质粒并通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达，使用亲和层析及凝胶过滤层析对目的蛋白进行纯化，使用SDSPAGE及Western blot对蛋白进行种类鉴定，分别使用Tych...