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| 鲤春病毒血症病毒RT-RAA-LFD检测方法的建立 | |
| 作者姓名： | 朱裕敏 吴江 廖立珊 王婉君 孙洁 陈兵 王津津 郑晓聪 贾鹏 刘荭 |
| 作者单位： | 1. 大连海洋大学;2. 深圳海关动植物检验检疫技术中心;3. 华润五丰肉类食品(河南)有限公司深圳分公司;4. 深圳技术大学 |
| 摘 要： | 为建立一种可现场快速准确检测鲤春病毒血症病毒(SVCV)的方法,本研究结合重组酶介导扩增(RAA)和侧向流试纸条(LFD)技术,根据SVCV L基因保守区域设计引物及探针,通过优化反应时间和温度等条件,初步建立了可用于SVCV现场可视化检测的RT-RAA-LFD方法。优化后的检测方法在35℃水浴锅中恒温反应15 min即可实现对SVCV目的基因片段的有效扩增。结果显示,该方法可以特异性的检测SVCV,并且不与病毒性出血败血症病毒、传染性鲑鱼贫血症病毒、病毒性神经坏死病毒等其他常见鱼类病毒发生交叉反应;对SVCV重组质粒标准品的检测限为2.42×102拷贝/μL,并具有较好的稳定性和重复性;采用该方法和病毒分离、套式RT-PCR、荧光定量RT-PCR、荧光定量RT-RAA共5种方法同时对45份临床样品检测,其中病毒分离、套式RT-PCR和荧光定量RT-PCR均检测到29份阳性样品,荧光定量RT-RAA和本研究建立的方法均检测到28份阳性样品,本研究与前3种方法的阳性符合率为97.8%,与荧光定量RT-RAA的阳性符合率为100%。上述结果表明,本研究建立的SVCV ... |
| 关 键 词： | 鲤春病毒血症病毒 重组酶介导扩增 侧向流试纸条 恒温扩增 快速检测 |