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| 基于盖他病毒nsP3基因的TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用 | |
| 作者姓名： | 魏新宇 王铭 杜炳辰 史智宾 杨德成 王靖飞 |
| 作者单位： | 1. 东北农业大学动物医学学院;2. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室 |
| 基金项目： | 国家自然这基金(32272980);;黑龙江省自然科学基金(YQ2021C038);;中国博士后基金面上项目(2019M650925); |
| 摘 要： | 为建立一种灵敏、特异且高效的检测盖他病毒(GETV)的TaqMan荧光定量RT-PCR方法,本研究根据GETV的nsP3基因设计特异性引物及探针,以GETV (SC483株) cDNA作为模板,扩增目的基因并克隆至p ET-29a载体中,构建重组质粒标准品p ET29a-nsP3并经PCR和测序鉴定。基于该质粒标准品,采用方阵法优化引物、探针浓度以及退火温度,初步建立了一种基于GETV nsP3基因的TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法,并绘制标准曲线。以GETV (SC483株、SC266株)、辛德毕斯病毒(SINV)、猪流感病毒(H3N2、SIV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪繁殖和呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)等病毒的基因组RNA反转录为cDNA作为模板,利用本实验建立的TaqMan荧光定量RT-PCR方法检测,结果显示,仅GETV为阳性,SINV、SIV、TGEV、PEDV、PRRSV均为阴性,表明该方法特异性较强;分别以10倍倍比稀释(3.07×10-1拷贝/μL～3.07×108拷贝/μL... |
| 关 键 词： | 盖他病毒 荧光定量RT-PCR nsP3 检测方法 |