miR-181a对牛骨骼肌卫星细胞分化的影响

为了探讨miR-181a对牛骨骼肌卫星细胞分化的影响,试验将分离培养的牛骨骼肌卫星细胞接种在6孔板中,待细胞汇合度为70%时,用PEI转染miR-181a的模拟物miR-181a-M、抑制剂miR-181a-I、模拟物对照miR-181a-M-NC和抑制剂对照miR-181a-I-NC进入牛骨骼肌卫星细胞中,在0,1,2,3天用Western-blot检测肌肉有关分化蛋白MyoD、MyoG和MYH3以及靶基因HOX-A11蛋白的表达量,用免疫荧光法检测细胞肌管的数量。结果表明:在牛骨骼肌卫星细胞中,转染miR-181a模拟物的牛骨骼肌卫星细胞,有关肌肉分化蛋白质如MyoD、MyoG和MYH3的表达量明显增加,细胞肌管数量显著增多,进一步证实miR-181a促进细胞的分化。在双荧光素酶报告系统中,miRNA-181a和HOX-A11基因的3'-UTR结合时荧光素酶活性明显下降,miRNA-181a和突变的3'-UTR结合时荧光素酶活性没有下降。说明HOX-A11是miR-181a的靶基因,miR-181a对牛骨骼肌卫星细胞的分化具有促进作用。