| CD163单等位基因表达的iPAMs细胞系的构建及其介导PRRSV感染的特征分析 |
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| 引用本文： | 王慧,冯保亮,向光明,黄雷,刘志国,李奎,牟玉莲.CD163单等位基因表达的iPAMs细胞系的构建及其介导PRRSV感染的特征分析[J].中国畜牧兽医,2023(7):2617-2628. |
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| 作者姓名： | 王慧 冯保亮 向光明 黄雷 刘志国 李奎 牟玉莲 |
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| 作者单位： | 1. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所;2. 天津市宁河原种猪场有限责任公司;3. 中国农业科学院深圳农业基因组研究所 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(32072690)；;天津市科技计划项目(22ZXZYSN00030)； |
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| 摘 要： | 【目的】试验旨在利用CRISPR/Cas9基因编辑技术获得CD163(cluster of differentiation 163)单等位基因表达的永生化猪肺泡巨噬细胞系(immortalized porcine alveolar macrophages, iPAMs),并探究其介导猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)感染的特征，为深入研究CD163基因在PRRSV感染中的作用机制奠定基础。【方法】在猪CD163基因外显子1区域设计8条向导RNA(single guide RNA,sgRNA),并将其连接到pX458载体中，通过T7E1酶切试验检测不同sgRNA载体的活性；将活性较高的3条sgRNAs表达载体电转染到iPAMs中，通过流式细胞术分选单克隆细胞，对获得的单克隆细胞进行基因型鉴定、蛋白表达检测、脱靶分析以及PRRSV感染分析。【结果】在设计的8条sgRNAs中有3条基因编辑效率在28%以上。基因型鉴定结果表明，50株片段敲除的单克隆细胞中有4株符合预期的CD163单等位...
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| 关 键 词： | CD163 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) CRISPR/Cas9 永生化猪肺泡巨噬细胞系(iPAMs) |
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